本文目录

1. 种蘑菇的菌种怎么自繁
2. 平板计数琼脂培养基溶解方法
3. 青霉斜面培养基特征
4. 平板计数琼脂培养基的配制步骤

种蘑菇的菌种怎么自繁

种植蘑菇的菌种是可以自繁的，但不知是想繁殖几级种。

种植蘑菇的菌种分为三种，分别是母种、原种、栽培种。其中母种叫一级种，原种叫二级种，栽培种叫三级种。母种，就是用蘑菇菌丝或孢子在试管培养基中培养出的菌种，也叫试管种，用于扩繁原种和菌种保存。原种，就是由母种扩大繁殖而得到的菌种，原种用来扩大繁殖栽培种，也可直接用于栽培。栽培种，就是由原种扩大繁殖而得到的菌种，用于蘑菇生产。

一，母种扩繁原种前的转管操作。

母种向原种的扩繁，分两种情况。一是母种数量足够进行所需要的原种繁殖，即刻可以开始繁殖原种，另一种是母种数量很少，繁殖原种所需母种数量不够，这就需要对母种进行转管操作。

转管是为了扩大母种数量，使母种数量达到制作原种所需要的母种数量。这样操作可加快扩繁速度，缩短扩繁周期。转管的操作如下:

【1】准备试管。

试管数量根据你要自繁的菌种级别和数量而定。正常情况抗下，一枚试管可转管制成20~30支试管菌种，一枚试管种可接种8~10瓶（袋）0.5~0.8kg（干基培养基）原种，一瓶（袋）原种可接种20~30袋栽培与原种同样重量的栽培种。通过计算即可知道要准备的试管数量。

【2】PDA培养基制作。

①培养基配方。

水1000毫升、马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g。按此数量制作的培养基，可装试管20支左右。

②煮制培养基。

马铃薯去皮切成颗粒状，量杯量取1000毫升水，与马铃薯碎块一起放入铝锅中煮沸，半小时后，多层纱布过滤所煮液体，放进量杯，液体加入琼脂、葡萄糖，搅拌至琼脂融化，水量补足1000毫升。

③装试管并扎捆。

趁热把培养基用漏斗装入试管，培养基量至试管的1/5~1/4，盖好胶塞后，用扎绳每7支捆成一捆。

④灭菌。

试管捆扎完毕，放进高压锅进行高压灭菌。灭菌温度121℃，压力0.105Mpa，这个状态下保持30分钟后，停止灭菌，期间要注意排尽高压锅中的冷气。

⑤培养基斜面操作。

把试管倾斜放置，让培养基形成斜面，斜面顶部位置在试管长度的1/2处。试管上应放置厚毛巾等物保温，避免试管内有水珠出现。

【3】接种转管。

①把试管放入经灭菌处理呈无菌状态的接种箱，做好母种试管消毒灭菌后带入接种箱，再进行一次外壁消毒。

②点燃酒精灯，在酒精灯火焰的保护下，打开母种试管和接受转接试管，进行接种，接种完毕立即盖好胶塞。

③恒温培养。

把接种完毕的试管，放入恒温箱进行培养，一般品种的蘑菇温度保持恒温在22~25℃之间，正常情况下，10~15左右，菌丝就能长满试管。

试管中菌丝长满试管，就可进行原种繁殖。

二，母种向原种扩繁。

母种扩繁成原种需要经历以下几个步骤，分别是培养基制作、培养基装瓶（袋）灭菌、接种、原种培养等。

【1】培养基制作。

培养基的原料种类，由蘑菇种类决定，是制作植物籽粒种、还是木屑种、或者是枝条种，由种植者自行决定。

培养基制作时，要注意培养基的配方组成，组成依据是种植蘑菇品种所要求的培养基的碳氮比，同时注意培养基的含水量和PH值要达到要求，在培养基搅拌过程中，各种原料要搅拌均匀。

【2】培养基装瓶（袋）和灭菌。

?培养基制作完毕，就要装瓶（袋）后灭菌，菌种瓶（袋）要选用专业标准的制式，利于机械装瓶（袋）。

?灭菌可采用常压和高压灭菌两种方式。灭菌时要注意以下几点:

⑴常压灭菌要注意种瓶（袋）的摆放，特别是采用袋装的原种，要注意摆放时不能挤压，袋间要有合适间距，不能影响灭菌效果。

⑵常压和高压灭菌都要排尽灭菌仓中的冷气，避免灭菌仓内形成冷死团，造成灭菌不彻底的后果。

⑶常压灭菌和高压灭菌，都要保证灭菌时长和灭菌温度。常压灭菌温度为100℃，并在这个温度条件下持续12小时以上，期间出现温度降低，要重新计时。高压灭菌温度要达到121℃，压力达到0.105Mpa在这个状态下保持90~120分钟。

⑷常压灭菌，灭菌完毕，培养基瓶（袋）要继续在灭菌仓中放置10小时以上，这个过程称为焖锅，可以增强灭菌效果。

【3】接种。

接种可以在接种箱中完成，也可以在接种室中完成，前提是必须做好接种箱和接种室的消毒灭菌，使其处于无菌状态。

⑴接种前接种箱或接种室的灭菌。

?接种箱采用福尔马林或绿霉净、百菌清等灭菌药剂擦拭，结合必洁仕或菇虫净、菇菌净等气雾剂熏蒸的方法进行灭菌处理。熏蒸灭菌时，接种工具一并接受灭菌处理。

?接种室采用必洁仕或菇虫净、菇菌净等气雾剂熏蒸灭菌，结合紫外线照射的方法进行。灭菌时，缓冲间与更衣室同步进行，接种工具、接种人员着装一并接受灭菌处理。

⑵做好试管种带进接种箱或接种室的前后消毒灭菌。

试管种进入接种箱或接种室前要用75%酒精全面擦拭试管外壁，进入后再次擦拭试管外壁和试管与胶塞连接处。

⑶做好接种时的保护。

?接种箱接种要在酒精灯火焰保护下进行接种。

?接种室接种时，要全程开启接种保护器。

⑷接种时，要减少菌种暴露时间。

?接种箱接种时，接种完毕，要立即扎紧原种袋口或盖好瓶塞。

?接种室接种时要严格执行接种操作规程，人员要换好着装，做好手部消毒，经缓冲间进入接种室，尽量避免走动，防止扬尘感染，接种完毕立即盖好瓶口或扎紧袋口，减少菌种空间暴露时间。

接种完毕，需迅速把原种瓶（袋）运进菌种培养场所，进行培养。

【4】菌种培养。

菌种进入培养场所前需对场所进行灭菌杀虫处理，采用绿霉净结合菊酯类杀虫剂喷洒，再用硫磺或菇虫净等气雾剂熏蒸的方法，保证培养场所内没有杂菌和害虫及其虫卵的残留，要做好以下几点。

⑴按蘑菇品种菌丝体生长需要调节好温度、空间相对湿度、光照和空间氧气含量。使各项环境因素处于最适宜菌丝体生长状态，以促进菌体健壮、快速生长。

⑵要使对菌种瓶（袋）的检查实行常态化，定时进行检查，一旦发现问题及时处理。发现杂菌感染，立即密封染菌菌袋，并移出培养场所，远离场所深埋或焚烧。

⑶做好门窗、通风通道和与外界相通通道的防护，如处于夏季需安装防虫网，防止害虫飞入，危害菌种，或在菌种中产卵。

菌丝长满原种瓶（袋），原种培养成功。

三，原种向栽培种扩繁。

原种向栽培种扩繁，与母种向原种扩繁，方法和步骤一致，可参考上述方法进行，这里不做赘述。

种植蘑菇的菌种自繁，最重要的是，在扩繁过程中，最重要的是防止杂菌的侵染，菌种一旦染菌，产生的为害不在于菌种本身的损失，可能为今后的种植埋下隐患。所以必须做好培养基的灭菌，接种场所的灭菌消毒，接种操作规程的执行，以及培养场所的消毒灭菌，同时做好培养场所各环境因素的调控，保证菌种质量安全，就是保证接下来种植过程的安全。

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平板计数琼脂培养基溶解方法

平板计数琼脂培养基的溶解方法如下：

1.准备所需材料：琼脂培养基，三角瓶，蒸馏水，量筒，移液管等。

2.称取适量琼脂培养基，加入三角瓶中。

3.加入适量的蒸馏水，按照琼脂培养基的使用说明书中的比例配制。通常比例为1克琼脂培养基加入100毫升蒸馏水。

4.充分搅拌混合，使琼脂培养基充分溶解。

5.将琼脂培养基溶液装入培养皿中，待凝固后即可使用。

需要注意的是，在制备琼脂培养基时，需要注意无菌操作，以避免污染。

另外，根据不同的实验目的和菌种要求，还可以在琼脂培养基中加入不同的营养物质和药物，以满足不同的需求。

为了保证实验的准确性和可靠性，建议根据琼脂培养基的使用说明书进行操作，并严格遵守实验室的操作规范和安全要求。

青霉斜面培养基特征

1)在斜面培养基中培养扩展青霉WH-3，25℃培养7天至长出浓密孢子，无菌生理盐水悬浮孢子并振荡混匀，用无菌的三层擦镜纸过滤除去菌丝体；

2)过滤后的上述孢子液接种至种子培养基中，25℃振荡培养24～36h，得到扩展青霉种子液；

3)取上述扩展青霉种子液转接至产酶培养基中，25℃振荡培养5天，获得相应的扩展青霉细胞和发酵液，然后分别将得到的扩展青霉细胞和发酵液加入到顺式环氧琥珀酸或其盐溶液中，30℃振荡培养，转化5天，得到细胞转化液和发酵液转化液；

4)向两种转化液中分别加入过量的CaCl2，得到酒石酸钙沉淀，过滤并用蒸馏水冲洗酒石酸钙沉淀，再用硫酸酸解酒石酸钙沉淀，然后过滤后得到的酸解液经过阴阳离子交换精制、浓缩、结晶、烘干后得到L(+)-酒石酸或其盐的成品。

所述的应用，其特征在于所述的斜面培养基为PDA培养基；所述的种子培养基为PDB培养基；所述的产酶培养基为YSM培养基。

平板计数琼脂培养基的配制步骤

1、将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2毫升；

2、加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，122摄氏度高压灭菌15分钟

3、如用于菌落计数，琼脂量为百分之1、5；

4、如作成平板或斜面，则应为百分之2。

现在有成品营养琼脂培养基，这种药品是厂商配制好的营养琼脂，可以加水后直接制作培养基，不需要自行配制。

关于平板计数琼脂培养基的配制步骤的内容到此结束，希望对大家有所帮助。